Коллекция древнерусского церковного искусства в музее начала складываться ещё в 20-30 гг. прошлого века. Основными источниками поступлений послужили закрывающиеся монастыри, церкви и дворянские усадьбы Дмитровского уезда. С годами коллекция темперной живописи постоянно пополнялась. В настоящее время коллекция включает в себя 350 предметов основного фонда. Самые ранние иконы в фондах музея относятся к XVI веку. Имеется в коллекции несколько подписных (авторских) работ.
В доме священномученика Серафима (Звездинского), епископа Дмитровского, находится представлена икона «Всевидящее око» являющаяся одним из самых таинственных, полных загадок, образов. Икона не связана с церковными праздниками. Её духовный смысл заключён в том, что она даёт верующим символическую картину мира и объясняет, что Господь всевидящ и вездесущ. Символико – аллегорическая композиция на слова Священного Писания о неусыпно всевидящем и всеведущем Христе.
В основе композиции таких икон лежит повторяющийся мотив круга. В центральном круге изображается Иисус Христос в иконографическом образе Спас Эммануил с благословляющим жестом. Из этого круга по диагонали исходят четыре луча. На их вершинах находятся четыре маленьких круга, внутри которых аллегорические символы евангелистов: Матфея – Ангел, Марка – Лев, Луки – Телец, Иоанна – Орёл. В сегментах следующего круга помещены фрагменты человеческого лица – глаза, нос, губы. Над ним по центральной оси запечатлена Богоматерь с воздетыми руками. Следующий круг (синий) может символизировать небо. За ним круг, по бокам которого и снизу представлены серафимы. Венчает композицию отдельный круг с изображением Бога-Отца Саваофа, окружённого сиянием божественного света и тремя шестикрылыми Серафимами. Он благословляет обеими руками всё мироздание.